1. Древесные растения.
Например, известно, что Populus alba и P. tremula образуют гибриды, широко известные как P. x canescens. В местах совместного произрастания они образуют большие «мозаичные» гибридные зоны. Такая гибридная зона была исследована в долине Дуная недалеко от Вены (Австрия). Зона отбора проб охватывала линейное расстояние примерно 110 км долины реки между Кремсом и Хайнбургом, включая пойму и «галерейный» лес, расположенный в пойме Дуная, Национальный парк (http://www.donauauen.at/) и прилегающие области. Гибридные морфотипы P. x canescens отбирались таким образом, чтобы максимизировать географическое покрытие в гибридной зоне. Для сбора материала родительских видов выбирают две соседние «популяции». Эти образцы были проанализированы ранее (Lexer et al., 2005) и было выяснено, что такие «популяции» правильно называть «субпопуляции», поскольку молекулярный анализ показал, что уровни обмена генами между видами высоки (Lexer et al., 2005) и что они образуют одну панмиктическую единицу для каждого вида. Для выделения ДНК молодые листья собираются и кладутся в селикагель. Для первой субпопуляции P. alba из долины Дуная в Австрии в зоне симпатрии отмечалась – только средняя точка отбора проб (центр области сбора образцов) (48,261 Н, 16.271 E); для второй субпопуляции из Румынии, расположенной вне зоны симпатрии, также отмечалась только средняя точка отбора проб: (43,771 Н, 23,961 E). Образцы P. tremula были собраны на Дунае (Австрия) в пределах зоны симпатрии: (средняя точка отбора проб – 48,281 Н, 15,891 E) и из Восточных Альп в Австрии вне зоны симпатрии (средняя точка отбора проб – 46,621 Н, 13.851 E). Размер выборки составил: 378 образцов для гибрида P. x canescens, 88 образцов для P. alba и 78 образцов P. tremula.
В Испании в гибридной зоне произрастания P. alba и P. tremula был собран материал с 432 и 505 соответственно с одиночно стоящих деревьев для изучения однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) из ДНК участка, ассоциированного с сайтом рестрикции (RAD). Проводили оценку геномной дивергенции, сравнения кариотипов и дифференциации по всем 19 хромосомам. Обнаружено преобладание гибридов F1 в центре геномных клин с одной стороны, и геномно и пространственно локализованные, изменчивые варианты, свидетельствующие о древней интрогрессии между родительскими видами. Была показана роль отбора против рекомбинантных генотипов в поддержании РИ (кажущаяся фертильности F1), что согласуется с моделью внутригеномной «коадаптации» барьеров к интрогрессии при вторичном контакте. Иногда зоны интрогрессивной гибридизации охватывают огромные пространства. Так, в Восточной Европе и Западной Сибири после отступления ледника сомкнулись и частично перекрылись ранее разделенные ледником ареалы ели европейской (Picea abies) и ели сибирской (P. obovata). Естественные гибриды между этими двумя видами морфологически и по молекулярным ядерным маркерам (аллозимы, микросателлиты) уклоняются то в сторону одного, то в сторону другого родителя и распространены в полосе, протянувшейся с северо-запада на юго-восток от Мурманской области до Пермской области и Башкирии. Гибриды часто называют ель финская (P. х fennica) и даже считают его молодым гибридогенным видом. Вероятно, что распространение гибридов P. abies × P. obovata, еще шире, до левого берега Оби включительно, на что указывают обнаруженные у фенотипически сибирской ели характерные для североевропейских популяций P. abies гаплотипы митохондриальной ДНК (Мудрик и др., 2016).
Сбор материала покрытосеменных древесных растений для изучения признаков вегетативной сферы гибридов и их родителей в зоне гибридизации, например, тополей, осуществляется в конце мая – июне, т.к. позже листья теряют опушение и поражаются грибами. Необходимо собрать в гербарий материал в виде удлиненного побега-ауксибласта с несколькими, расположенными на нем брахибластами.
В день сбора материала данные о площади популяции и координаты границ популяции заносятся в специальное приложение с геолокациями (например, Google Earth, где можно узнать площадь участка и отметить координаты отдельных образцов).
Для дальнейшей статистической обработки необходимо собрать фрагменты побегов не менее 10 каждого родительского вида и 30 гибридных особей.
Для анализа микроморфологии листьев с использованием светового и сканирующего электронного микроскопа молодые листья фиксируются в 70% этиловом спирте.
Изучение признаков макроморфологии поверхности ствола и ветвей осуществляется на месте. Анализируется окраска, структура поверхности ствола, скелетных и малолетних ветвей.
Признаки, отличающие гибрид от родителей и родителей друг от друга, заносят в диагностическую таблицу.
Весной, в период цветения тополей проводятся исследования генеративной сферы: мужских и женских соцветий, а также созревших плодов и семян. В данном пособии мы не рассматриваем методики изучения признаков генеративной сферы.
2. Травянистые растения.
Виды рода шалфей Salvia L. часто образуют естественные межвидовые гибриды в зоне совместного произрастания. Многие из которых были описаны как нотовиды – таксоны гибридного происхождения (Simonkai, 1900; Hrubý, 1935; Epling, 1947; Reales et al., 2004, Nachychko et al., 2017а, 2017б). Salvia transsylvanica относится к видам с высоким потенциалом к гибридизации (Tychonievich & Warner, 2011) игибридизирует с S. nemorosum L., S. nutans L. и S. pratensis L., которые могут встречаться в тех же местообитаниях, что и S. transsylvanica (Prodan, 1957; Simonkai, 1900; Răvăruţ & Nyárády, 1961). Гибриды этих видов были описаны как нотовиды: S. x hybrida Schur (1866) [S. nemorosum x S. transsylvanica], S. x telekiana Simonkai и Thaisz (Simonkai, 1900) [S. nutans x S. transsylvanica] и S. x bichigeanii Prodan (1957) [S. pratensis × S. transsylvanica]. Из-за того, что они встречаются исключительно в пределах ареала S. transsylvanica, эти гибриды, по-видимому, там же и возникли.
Несмотря на то, что первоначально S. transsylvanica был описан как разновидность S. pratensis (см. ниже), в настоящее время его считают отдельным видом (Ciocârlan, 2009; Nikolova & Aneva, 2017; Govaerts et al., 2019). От близкородственного и более распространенного европейского вида S. pratensis он отличается густо белоопушенными листьями снизу (Hedge, 1972) и числом хромосом 2n = 16 (Tychonievich & Warner, 2011). Напротив, листья S. pratensis почти голые снизу (Hedge, 1972), а число хромосом обычно равно 2n = 18, но иногда также указывается 2n = 16, 20 и 32 (Rice et al., 2015), хотя это может быть связано с ошибочной идентификацией растения.
Гибриды S. transsylvanica (S. x hybrida, S. x telekiana и S. x bichigeanii) спонтанно встречаются на территориях, где произрастают оба родительских вида и образуют зону гибридизации. Они имеют промежуточное значение некоторых морфологических признаков между S. transsylvanica и соответствующими родительскими видами (S. nemorosum